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胚胎移植又称为受精卵移植,是畜牧生产上正在发展的一项新技术,即从经过超排处理的波尔母羊(供体羊)的输卵管或子宫内取出许多早期胚胎,移植到另一群当地普通母羊(受体羊)的相应部位,以借腹怀胎,产生供体波尔母羊的后代的方法在养羊业生产中,从80年代开始已逐渐成熟并在生产中应用,特别是近几年肉羊产业的发展,胚胎移植技术得到广泛的应用和提高.采用此方法能够有效地发挥波尔山羊的繁殖潜力和遗传潜力,并能加快波尔山羊的繁育及推广速度,是继人工授精之后的第二代家畜繁殖新技术.
波尔山羊胚胎移植的原理和基本原则
1 原理
在自然情况下,波尔山羊母羊的系列是按照发情、排卵、配种、受精、妊娠及分娩这个程序进行的。胚胎移植则是将这个自然系列程序由两部分母羊来分别承担完成。先将供体羊与受体羊同时进行同期发情处理。与此同时，供体羊还需进行超数排卵处理。然后用优良波尔山头种公羊给供体羊进行配种，于是在供体羊（波尔山羊）生殖道内便产生许多胚胎。再将这些胚胎取出体外检验，并移植给与供体羊同期发情、排卵，但未经配种的受体羊（即普通本地羊，如沂蒙黑山羊等）生殖道内相应部位。植入的胚胎在受体羊体内继续发育，完成妊娠，最后分娩产出胎儿。供体羊的超数排卵技术和受体羊的同期发育技术是羊胚胎移植技术的两项养分技术。超数排卵技术在使用常规超排药物促卵泡激素的同时，结合使用孕激素、氯前列烯醇、促黄体素等药物，对羊的超数排卵程序进行了技术创新和改进，可显著提高羊的超排效果，使波尔山羊母羊超排获可用胚胎数达15枚左右。同期发情技术则创造性地采用了复生殖激素（孕激素、孕马血清、氯前列烯醇）对受体羊进行同期发情处理的新方法，同时发情率可达95%左右，发情时间主要集中在撤栓后的24~36小时。
2 操作原则
波尔山羊胚胎移植前后所处环境的应当尽可能保持一致，即波尔山羊胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应。包括生理上的一致性（即供体和受体在发情时间上的一致）和解剖位置上的一致性（即移植后的胚胎与移植前所处的空间环境的相似性）以及种属一致性（即供体与受体应属于同一物种，但并不排除种间移植成功的可能性）。
波尔山羊胚胎和收集的期限（胚胎的日龄）不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常是在供体发情配种后3~5日内收集和移植胚胎。
在波尔山羊胚胎移植全部操作过程中，山羊胚胎不应受到任何不良因素（物理的、化学的、微生物的）影响而危及其生命力。移植的胚胎必须经鉴定并认为是发育正常的。
波尔山羊胚胎移植的主要技术措施与方法
1 供、受体选择和饲养管理
胚胎移植成功率主要依赖于供体生产的胚胎质量和接受胚胎移植的受体质量，所以供、受体的选择及饲养管理工作极为重要。
1．1供体选择
供体羊群（即波尔山羊母羊）应有健全的传染病、寄生虫防治措施。供体健康状况良好，生殖器官正常，未孕。供体母羊至少应有一胎以上的正常繁殖史，繁殖力较高，断奶1个月以上。青年后备母羊超排效果较差，一般不宜做供体。过老的母羊由于卵巢机能减退或萎缩，超排效果及胚胎质量也有所下降，也不宜做供体。如奶山羊上的超排结果表明，对1~3胎母羊超排时，平均排卵数随胎次增高而增加，3~8胎则随胎次增高而下降，所以在羊的生产性胚胎移植时一般选择2~5胎的母羊作为供体。
1．2 受体选择
受体羊（即普通本地羊，如沂蒙黑山羊等）的生产性能并不重要。但必须是健康状况良好，无生殖器官疾病的适繁母羊。年龄过大的个体繁殖力降低、生死器官可能出现不易观察到的疾病，对移植结果会有一定的影响。考虑到分娩的疾病，也不宜选用体型过小的后备青年母畜。
1.3
1．3 供、受体饲养管理
胚胎移植供、受体羊饲养管理应遵循一般繁殖羊群的原则。保持羊群体况适度，太肥或太瘦都会对超排及移植有不良影响。要根据羊群营养状况适时调整日粮标准，并注意矿物质和维生素的供应。舍饲羊要有适当的运动。
供体的营养状况对羊的超排效果和胚胎质量有重要影响。上等膘情的供体母羊超排效果显著好于膘情较差的母羊。据实验证明，在同一季节，使用同一生产厂家、同一批号的FSH，同样的超排程序，其结果有明显差异。饲养水平好、羊只体况好的羊场，超排母羊发情比较整齐，公羊性欲旺盛、配种相对而言较为顺利；饲养水平差、羊只体况较差的羊场，超排母羊发情不整齐，公羊性欲极差，难以完成配种任务。
移植的胚胎要在受体体内发育为胎儿，所以受体必须能够保证胎儿正常发育的营养需要。受体羊群的饲养管理应和供体羊群同样对待，一般要求保持中等以上营养水平。营养水平正常的受体羊，胚胎移植后妊娠受体流产率较低；如果放牧或饲养条件差，补饲又不足，而导致受体羊群体质衰弱时，妊娠受体流产率相对较高。
胚胎移植进行之前，供、受体羊发情周期的观察是超排处理和胚胎移植成败的重要因素。因为只有准确掌握供体的发情周期，才有利于超排程序的选择和安排，也只有发情周期正常才能说明母羊处于正常的繁殖生理状态，如果供体周期异常常会导致超排处理的失败，受体周期异常则其卵巢上往往不能形成正常的功能黄体而不能移植。运输、饲养管理条件的改变以及气候的异常变化等，可使发情周期的范型发生暂时性改变。所以，在超排处理前、后的一段时间内应尽量避免应激。供体畜群在适应性饲养期以后，至少要连续观察到两个正常周期，才能进行超排处理，并注意预防气候突变带来的不良影响。
2 供体的超排与受体的同期发情
2．1 供体（波尔山羊母羊）的超排
供体超数排卵简称超排。目的是为了增加有活力卵子的数量。由于波尔山羊的发情周期不太稳定，在超排处理前，皮下注射苯甲雌二醇2mg，并用阴道海绵栓预处理7~10d后，再开始超排处理。方法是：用总量350IU的FSH（促性腺激素），每日注射2次，连续3~4d。首次剂量为100IU，以后逐日递减。于处理的第三天下午或末次注射FSH前的36h撤除海绵栓，并注射前列腺素。也可将FSH250~300IU溶于30%的PVP（聚乙烯吡咯烷酮）中1次肌肉注射，撤除海绵栓和注射前列腺素的时间与多次注射时相同。一般于处理结束后的第二或第三天发情配种。在供体超排处理的同时要对受体进行同期发情处理，合受体与供体相同的发情阶段，以便移植胚胎。
2．2 受体（即普通本地羊，如沂蒙黑山羊等）的同期发情
对母羊进行同期发情一般采取两种手段，即孕激素处理和PG（氯前列烯醇）处理。
用实用型诺酮阴道栓或羊用CIDR（T型阴道栓）预处理10~12d后撤除阴道栓，在撤栓前12h和撤栓时分别注射FSH25IU（宁波）或0.5mg(中科院).撤栓后36~48h发情.
单次注射PG(氯前列烯醇)0.1mg,无论是否发情,在注射PG后5~6d按上面方法处理.
单次注射PG(氯前列烯醇)0.1mg,次发情羊用于受体.1次处理不发情的羊在第一次处理后的9~11d第二次注射,发情后的羊作为移植用的受体羊.
隔11~12d两次分别PG(氯前列烯醇)0.1mg,2次注射后48~60h发情.后两种方法在2次注射PG时配合使用FSH(促性腺激素)很有必要.
注意:受体撤栓的时间要比供体撤除的时间提前12~24h.
3 胚胎回收(采卵)
胚胎回收也称采卵,就是将经过超排处理和配种的供体的早期胚胎,从其生殖道内冲洗出来,经过鉴定,再把有发育能力的胚胎分别移植给同期发情的受体羊。山羊鲜胚移植时,胚胎回收的时间以4~6d为宜.回收过早,胚龄小,移植成功率低..回收过晚,胚胎在子宫内退化增多,回收率降低,回收到的可移植胚胎数量减少.
胚胎回收(采卵)的方法分为手术法和非手术法两种.
3.1 手术法
按外科剖腹术的要求进行术前准备.手术部位位于右肋部或腹下乳房至脐部之间的腹白线处切开.伸进食指找到输卵管和子宫角,引出切口外。如果在输精后3~4d期间采卵，受精卵还未移行到子宫角，可采取输卵管冲卵的方法。将一直径2mm,长约10cm的聚乙烯管从输卵管腹腔口插入2~3cm ,另用注射器吸取5~10ml30℃左右冲卵液,连接7号针头,在子宫角前端刺入,再送入输卵管峡部,注入冲卵液.穿刺针头应磨钝,以免损伤子宫内膜;冲洗速度应缓慢.使冲洗连续地流出.如果在车精后5d收胚，还必须做子宫角冲胚。即用10~15ml冲卵液由宫管结合部子宫角上部向子宫分叉部冲洗.为了使冲卵液不致由输卵管流出,可用止血钳夹住宫管结合部附近的输卵管,在子宫角分叉部插入回收针,并用肠钳夹住子宫与回收针后部,固定回收针,并使冲卵液不致流入子宫体内.
3.2 非手术法
非手术采卵一般在输精后5~7d进行了.可采用二路导管的冲卵器.二路式冲卵器是由带气囊的导管与单路管组成的。导管中一路为气囊充气用,另一路为注入和回收冲卵液用.导管中插1根金属通杆以增加硬度,使之易于通过子宫颈.一般用直肠把握法将导管经子宫颈导入子宫角.为防止子宫颈紧缩及母牛努责不安,采卵时可在腰荐或尾椎间隙用2%的普鲁卡因或利多卡因5~10ml进行硬膜外腔麻醉.操作前洗净外阴部并用酒精消毒.为防止导管在阴道内被污染,可用外套膜(有商品出售)套在导管外,当导管进入子宫颈后,扯去套膜.将导管插入一侧子宫角后,从充管向气囊充气,使气囊胀起并触及子宫角内壁,以防止冲卵液倒流.然后抽出通杆,以单路管向子宫角注入冲卵淮,每次15~50ml,冲洗5~6次,并将冲卵液收集在漏斗形容器中.为更多地回收冲卵液,可在直肠内轻轻按摩子宫角.用同样方法冲洗对侧子宫角.
冲卵液多数为组织培养液,如林格氏液、杜氏磷酸盐缓冲液（PE）、布林斯特氏液（BMOC-3）和TCM-199等。常用的为杜氏磷酸盐缓冲液，加入0.4%的牛血清白蛋白或1%~10%犊牛血清.冲卵液温度使用应为35%~1000mg,以防止生殖道感染.
注意:波尔山羊胚胎回收一般采用手术进行,经子宫回收.
3.3胚胎检查(检卵)
检卵:将收集的冲卵液于37℃温箱内静置10~15min胚胎沉底后,移去上层液.取底部少量液体移至下皿内，静置后，在实体显微镜下先在低倍（10~20倍）下检查胚胎数量,然后在较大倍数(50~100倍)下观察胚胎质量.
吸卵:吸卵是为了移吸、清洗、处理胚胎，要求目标准确，速度快，带液量少，无丢失。有序卵可用1ml的注射器装上特别的有序头进行，也可使用自制的吸卵管。
胚胎质量鉴定：正常发育的胚胎，其中细胞（卵裂球）外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。无卵裂现象（未受精）和异常卵（外膜破裂、卵裂球破裂等）都不能用于移植。
胚胎处理：正常的胚胎要用新鲜培养液洗涤数次进行净化处理后，再保存于培养液中准备移植。检查和临时保存胚胎的操作室温度最好保持警惕在18~25℃之间。
4 胚胎移植（移植）的方法
4．1手术移植
先将受体羊（即普通本地羊，如沂蒙黑山羊等）作好术前准备。然后对受体羊进行腰荐麻醉，腹下做一小切口，将子宫角引出创口外，用移植器械吸取1~2枚形态正常的胚胎，注入子宫角前1/3的腔内，再将子宫角送回腹腔，缝合创口。术后1~2h ,待行动自如后才可恢复放牧，不需要其它的特殊护理。
4.2非手术移植
非手术移植一般在发情后第6至第9天（即胚泡阶段）进行，过早移植会影响受胎率。在非手术移植中采用胚胎移植枪和0.25ml细管移植的效果较好.将细管截去适量,吸入少许保存液,吸一个气泡,然后吸入含胚胎的少许保存液,吸入一个气泡,最后再吸取少许保存液.将装有胚胎的吸管装入移植枪内,通过子宫颈插入子宫角深部,注入胚胎.非手术移植要严格遵守无菌操作规程,以防生死道感染.
5 胚胎移植成功率的影响因素
供体羊取决于成年母羊体内环境、外界因素、胚胎质量的好坏。受体羊主要在于与供体羊发情的同步化程度，受体羊的黄体功能、品种、年龄、手术操作及外界等多方面因素，都将影响胚胎移植的成功率。
胚胎质量和发育期对成功率的影响：发育延迟和变性胚胎移植的成功率很低；胚胎移植在普通温度下进行的成功率较高，而在高温条件下的成功率低，所以胚胎回收后应立即进行处理，马上进行移植或进行冷冻保存。鲜胚一般在外界保存时间不超过4~8h，才能获得较高的成功率。
胚胎移植手术时，采用腰荐麻醉可阻断子宫的神经传导通路，避免因手术中对生殖的刺激，反射性地分泌催产素，致使移植的胚胎被排出，从而提高胚胎移植的成功率有极大的帮助，而如果采用局部麻醉则起不到这种作用。
6 胚胎移植社会、经济效益分析
对母羊进行一次胚胎移植手术，可使一只母羊较自然繁殖多产纯（良）羔羊5只左右，以每只羔售价0.6~0.8万元计通过胚胎移植技术可使饲养一只良种母羊多获毛利3~4万元。
7 胚胎移植的市场发民前景 我国存栏羊数量达2.6亿只，由于生产性能较低而急需进行改良，以每1000只存栏羊配备1只纯（波尔山羊或其它国内外优良种羊）种羊计算，全国需纯（良）种羊高过2600万只，而我国现有优良种羊数量仅几十万只，需求数量缺口极大。山羊胚胎移植技术作为加快良种山羊（如波尔山羊）繁殖速度的一项有效途径，应用前景十分广阔。
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